1 / 2017 / vol. 6
Kosmetologia Estetyczna
109
artykuł naukowy
Kosmetologia Estetyczna
N
Tabela 2
Wybrane testy wykorzystywane w ocenie działania drażniącego substancji na skórę
Lp. Metoda
Aktualny
status
Wytyczne
międzynarodowe
wg OECD
1.
Testy
in vitro
z wykorzystaniem zrekonstruowa-
nego ludzkiego naskórka – EpiDerm, EPISKIN,
SkinEthic oraz LabCyte EPI-MODEL 24
SIT
Ukończone OECD TG 439 [41]
2.
Testy
in vitro
z wykorzystaniem zrekonstruowa-
nego naskórka ludzkiego (RhE). Koreański
model naskórka
W trakcie -
Źródło:
[7]
Test z wykorzystaniem LabCyte EPI-MPDEL 24 powstał przy
wsparciu Japońskiego Stowarzyszenia Alternatyw dla Do-
świadczeń na Zwierzętach JSAAE (
Japanese Society for Al-
ternatives to Animal Experiments
). Podobnie jak w przypadku
modelu EpiDerm, komórki do budowy modelu są pozyskiwane
z napletków noworodków. Model posiada cechy naskórka ludz-
kiego, jest wielowarstwową strukturą z pełni zróżnicowanym
nabłonkiem [12].
|
|
Ocena działania fototoksycznego substancji
Fototoksyczność to reakcja, na którą składa się jednoczesne
działanie substancji chemicznej oraz promieni UV na skórę.
Zjawisko to dotyczy zarówno kosmetyków, jak i leków, a nawet
niektórych składników żywności.
Tabela 3
Wybrane testy stosowane w ocenie działania fototoksycznego substancji
Lp. Metoda
Aktualny
status
Wytyczne
międzynarodowe
wg OECD
1.
Test wychwytu czerwieni obojętnej – 3T3 NRU
(
Neutral Red Uptake
)
Ukończony OECD TG 432 [45]
2.
Test hamowania wzrostu drożdży oraz test
fotolizy krwinek czerwonych
W trakcie
ewaluacji
-
3.
Test wytwarzania reaktywnych form tlenu oraz
badanie fotostabilności
W trakcie
ewaluacji
-
Źródło:
[7]
Metodami alternatywnymi z zakresu fototoksyczności jest
•
w pełni ukończony i zwalidowany test wychwytu czer-
wieni obojętnej – 3T3 NRU (
Neutral Red Uptake
)
oraz dwa testy w trakcie ewaluacji:
•
test hamowania wzrostu drożdży oraz test fotolizy krwinek
czerwonych;
•
test wytwarzania reaktywnych form tlenu oraz badanie fo-
tostabilności (tabela 3).
Test wychwytu czerwieni obojętnej jest na terenie Unii Europej-
skiej metodą obowiązkową przy badaniu działania fototoksycz-
nego. Badanie prowadzi się na mysich fibroblastach i stanowi
ono porównanie wyników działania cytotoksycznego substancji
poddanych promieniowaniu UV do wyników działania cytotok-
sycznego substancji bez udziału promieniowania UV [13].
|
|
Metody badania toksyczności substancji
wobec gałki ocznej
Ludzka gałka oczna jest skomplikowanym organem o zróżnico-
wanej budowie. Najbardziej narażonymi na uszkodzenia tok-
syczne strukturami są jednak rogówka i spojówka. Pierwotnie
stosowanym testem do badania działania toksycznego wobec
gałki ocznej był test Draize`a. Ze względu jednak między inny-
mi na jego niską precyzję zastąpiono go bardziej humanitarny-
mi metodami alternatywnymi (tabela 4).
Tabela 4
Wybrane testy stosowane w ocenie toksyczności substancji wobec gałki ocznej
Lp. Metoda
Aktualny
status
Wytyczne
międzynarodowe
wg OECD
1.
Badanie zmętnienia i przepuszczalności
rogówki bydlęcej BCOP (
Bovine Corneal Opacity
and Permeability
)
Ukończony OECD TG 437 [49]
2.
Test na izolowanym oku kurzym ICE (
Isolated
Chicken Eye
)
Ukończony OECD TG 438 [50]
3.
Ocena histopatologiczna
Ukończony OECD GD 160 [51]
4.
Test cytotoksyczności SIRC CVS (
Crystal
Violet Staining Assay
) – test barwienia fioletu
krystalicznego
W trakcie
walidacji
-
5.
Test cytotoksyczności – trójwymiarowy model
tkanki skórnej MATREX
W stadium
planowania
-
6.
Test cytotoksyczności – test krótkotrwałej
ekspozycji STE (
Short Time Exposure
)
W trakcie
ewaluacji
-
7.
Środki znieczulające, przeciwbólowe do
rutynowego stosowania w TG 405
Ukończony OECD
uaktualnione
TG 405 (2012)
8.
Test uwalniania fluoresceiny FLT (
Fluorescein
Leakage Test
)
Ukończony OECD TG 460 [52]
9.
Zrekonstruowane modele ludzkiej tkanki do
oceny podrażnienia oka EpiOcular EIT (
Eye
Irritation Test
), Skin Ethic HCE (
Human Corneal
Epithelium
)
W trakcie
walidacji
-
Źródło:
[7]
•
Badanie zmętnienia i przepuszczalności rogówki bydlęcej
BCOP (
Bovine Corneal Opacity & Permeability Assay
). Test ten
został opracowany w 1992 roku i wykorzystuje wyizolowane
bydlęce rogówki będące produktemubocznympozyskiwanym
z rzeźni. Właściwości drażniące w stosunku do gałki ocznej
są ustalane na podstawie wpływu substancji na zmętnienie
rogówki oraz jej przepuszczalność. Zmiany te mogą świad-
czyć o denaturacji białka lub utracie funkcji barierowej tkanek
w rogówce. Dzięki tej metodzie badane substancje można po-
dzielić na mocno i umiarkowanie drażniące [14-16].
•
Test na izolowanym oku kurzym ICE (
Isolated Chicken Eye
).
Służy do określania toksyczności zarówno dla pojedynczych
substancji, jak i ich mieszanin [17]. Materiał wykorzystywa-
ny do badań w tym przypadku pozyskiwany jest z ubojni
drobiu i musi być pozbawiony wszelakich uszkodzeń i zmęt-
nień oraz dostarczony do laboratorium w ciągu godziny.
Na dostarczonym materiale po 10-sekundowej ekspozycji
na substancję potencjalnie szkodliwą dokonuje się obserwacji
pod względem wystąpienia zmętnienia, obrzęku, uszkodzenia
nabłonka, a także uszkodzeń powierzchni gałki ocznej [17, 19].
